激酶富集分析是一种专门用于研究蛋白激酶及其底物活性的蛋白质组学技术，广泛应用于细胞信号转导、癌症研究、药物开发及疾病机制解析等领域。蛋白激酶是细胞内的调控因子之一，通过催化蛋白质的磷酸化修饰，调节多种生物学过程，包括细胞增殖、分化、凋亡和代谢。由于激酶异常活性与多种疾病（如癌症、神经退行性疾病、代谢紊乱）密切相关，激酶富集分析在精准医学和靶向治疗研究中具有价值。激酶富集分析的核心在于利用特定策略选择性富集磷酸化蛋白或激酶，从复杂的生物样本中提取与信号通路相关的关键分子并结合高分辨率质谱分析，揭示蛋白激酶网络及其调控机制。与传统的全蛋白质组分析相比，激酶富集分析能够有效提高低丰度激酶和磷酸化肽的检测能力，从而增强对信号传导事件的解析能力。尽管激酶富集分析具有诸多优势，但其仍然面临一些技术挑战：例如，部分富集方法可能存在非特异性结合，导致背景噪声增加，影响数据准确性；细胞或组织样本中蛋白激酶的活性受多种因素影响，包括实验处理方式、细胞培养条件及信号通路的交叉调控，数据解释需谨慎。其次，某些激酶本身可能携带翻译后修饰，如乙酰化或泛素化，这些修饰可能影响其磷酸化检测，需结合多种组学方法进行综合分析。

一、激酶富集分析的技术策略

激酶富集分析的关键在于选择合适的富集方法，以提高目标激酶或磷酸化底物的检测效率。常见的富集策略主要包括以下几类：

1、磷酸化肽富集

由于蛋白激酶的主要功能是催化底物蛋白的磷酸化，因此磷酸化肽的富集能够间接反映激酶活性，常用的磷酸化肽富集方法包括金属氧化物亲和富集、钛离子亲和层析和免疫亲和富集。这些方法能够选择性捕获磷酸化修饰的肽段，增强激酶底物分析的灵敏度。

2、激酶亲和纯化

利用特定的小分子激酶抑制剂或ATP类似物作为探针，通过共价结合或非共价相互作用捕获活性激酶，此类方法可以直接筛选细胞或组织中的激酶群并用于激酶-底物关系研究。

3、活性依赖型激酶捕获

采用ATP类似物或磷酸化位点特异性抗体，选择性标记和捕获活性激酶以分析其功能状态，这种方法适用于筛选激酶抑制剂或研究细胞信号传导途径。

4、功能性蛋白质组学

通过磷酸化抗体阵列或基于微阵列的激酶活性测定等技术，高通量检测细胞或组织样本中激酶的表达水平和磷酸化状态。这类方法能够全面解析信号通路的变化，为生物医学研究提供更完整的激酶活性图谱。

二、激酶富集分析的实验流程

激酶富集分析通常结合高灵敏度质谱技术以实现对激酶及其底物的高通量检测，实验流程主要包括以下几个步骤：

1、样本制备

从细胞、组织或血液样本中提取蛋白并使用特定的裂解缓冲液保持蛋白激酶的活性。

2、蛋白质酶解

利用胰蛋白酶（Trypsin）或Lys-C等蛋白酶将总蛋白水解为肽段以提高后续质谱分析的灵敏度。

3、激酶或磷酸化肽富集

根据实验目标选择适当的富集策略，例如磷酸化肽富集（TiO₂、MOAC）、激酶活性捕获（ATP类似物）或免疫亲和富集（抗磷酸化抗体）。

4、液相色谱-质谱分析（LC-MS/MS）

利用高效液相色谱分离肽段并结合高分辨率质谱（如Orbitrap、Q-TOF）进行精准检测。

5、数据分析

使用专业的蛋白质组学软件（如MaxQuant、Proteome Discoverer）进行肽段鉴定并结合生物信息学工具（如KEGG、Reactome）解析激酶-底物关系及信号通路变化。

百泰派克生物科技提供专业的蛋白质组学生物信息学分析服务，涵盖磷酸化肽富集、激酶活性筛选及高通量质谱检测。依托先进的蛋白质组学平台，我们致力于为科研人员提供高灵敏度、高特异性的信号通路解析方案。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目